G3商讯:核酸纯化试剂广泛运用于酶反应产物DNA回收,DNA片段筛选,高通量测序文库构建,其使用方法简单、高效快速,又因其精度要求较高,在使用过程中常遇到检测结果不准确的问题,现把它总结归纳如下,以供参考:
一氪生物磁珠法核酸纯化试剂
1纯化反应干扰物
干扰物有高浓度蛋白、BSA,这两种物质会导致磁珠聚沉,从而影响纯化效率,需要添加SDS处理后进行纯化。
2片段选择性能准确性干扰物
干扰物有yichun,异Bing醇,聚乙er醇,会影响片段选择回收效果,需要上调或下调磁珠使用量。
3回收片段大小限制:
大小范围为100bp-20kb,超范围片段回收效率将显著降低。
4应用范围限制:
仅用于常规分子生物学反应溶液中的DNA的纯化,磁珠不含裂解细胞及蛋白成分,不可用于组织、细胞、血浆等生物样本的DNA提取。
5原有过膜纯化方法更换为磁珠纯化方法可能带来的预期外影响
磁珠法纯化不同于过膜法纯化的原理,在替换的过程中可能预见的问题主要有:
1)磁珠法纯化中,纯化产物会存在痕量的反应液残留。
2)纯化片段大小可能发生变化
推荐评价检测方法:
1)杂质残留影响,建议进行试用评估及测试,检测最终结果。
一般的二代测序文库构建过程中,末端修复、3‘端加A、及接头连接反应中应用磁珠法纯化,痕量残留不会对后续反应造成影响。
2)有特殊片段大小需求的情况下,可根据目标片段大小选择适宜的纯化磁珠用量。
通过上述常见的使用问题呈现和改善方法希望大家能更好的做好纯化,为需要的客户做好服务工作!
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